食品企业洁净室（区）沉降菌监测操作规程要点

       很多食品企业都设置有自己的洁净车间，食品企业工厂微生物实验室也是有严格的洁净度要求。那么具体如何来监测洁净室或者洁净车间的沉降菌呢？请看这一篇，按洁净室（区）沉降菌监测操作规程来执行吧！

 

 

1 目的

对食品企业洁净车间/微生物实验室洁净区的环境进行洁净度定期监测，确保其环境空气质量符合相应的要求。

2 适用范围

适用于食品企业洁净生产车间、微生物无菌室和百级工作台等洁净区域沉降菌的监测。

3 参考标准

GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 

GB 15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准 附录E 生产环境采样与测试方法

4  监测流程

4.1 实验仪器与培养基

4.1.1高压蒸汽灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。

4.1.2恒温培养箱、霉菌培养箱：定期对培养箱温度进行校准。

4.1.3无菌培养皿：直径90mm。

4.1.4 培养基：

（1）菌落总数：营养琼脂、平板计数琼脂、大豆酪蛋白琼脂培养基或其他经验证了的培养基。

（2）真菌：马铃薯葡萄糖琼脂、孟加拉红、沙氏培养基或其他经验证了的培养基。

4.2 监测人员

4.2.1监测人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

4.2.2动态和静态两种状态均可进行测试。静态监测时，室内监测人员不得多于二人。正常生产时沉降菌试验状态为动态测试，并在测试报告中注明测试状态。

4.3 测试时间

4.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

4.3.2 对非单向流，如10 000级、100 000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

4.4测试方法

4.4.1 培养基制备：在超净工作台内，将灭菌后的培养基倾注于无菌培养皿内，每皿15mL~20mL，凝固后待用。

4.4.2 采样前准备：采样员采样前穿戴洁净服、无菌帽子、一次性口罩及手套，用75%酒精对手部进行消毒；沉降菌测试前，检查洁净室(区)环境的温度和相对湿度是否与其生产及工艺要求相适应(无特殊要求时,温度在18℃~26℃,相对湿度在45%~65%为宜)。

4.4.3采样点的确定：室内面积不超过30m²，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30m²，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m；

4.4.4样品采集：采样时，将已制备好的培养皿，按洁净区沉降菌采样点布置图的要求逐个放置，工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面），并避开空调、门窗等空气流通处，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

4.4.5 采样时间：静态测试时,培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时,培养皿暴露时间为不大于4h。

4.4.6 培养：全部采样结束后，将培养皿置于培养箱中培养，营养琼脂、平板计数琼脂或大豆酪蛋白琼脂培养皿放置恒温培养箱中36℃±1℃培养48h±2h，马铃薯葡萄糖琼脂、孟加拉红琼脂或沙氏琼脂培养基培养皿在霉菌培养箱中28℃士1℃培养5d。

4.5菌落计数

4.5.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计。

4.5.2 求出全部采样点的平均菌落数，以每个采样点平均菌落数（CFU／皿）报告结果。

图1、沉降菌监测的过程

4.6 结果判定

对于监控指标，大部分食品标准中并未明确规定说明具体指标，企业在制定沉降菌监控指标时可参考下列标准：

GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准

DBS 43/007-2018 米粉生产卫生规范 附录A 米粉生产过程微生物监控要求      

DBS 43/008-2018 湿面生产卫生规范 附录A 湿面加工过程微生物监控要求

DBS 43/009-2018 气调包装酱卤肉制品生产卫生规范 附录A 气调包装酱卤肉制品加工过程微生物监控要求

洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准，测定的各项指标符合相关的技术要求，则认为环境空气质量良好，满足检测/生产要求，可正常开展检测/生产工作。否则需分析原因，评估产生偏移的严重程度并采取纠正措施，对不合格区域进行消毒处理，重新进行监测，直至监测结果符合技术要求，方可开始检测/生产工作。

4.7 本实验室/生产洁净区域环境微生物监控要求

表1洁净区域环境微生物监控要求

5 注意事项

5.1洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。

5.2取样时，应尽量避免在回风口附近取样，并尽量少走动，且测试人员应在取样的下风测。

5.3应同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。

5.4测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

6 记录表单

每次执行完沉降菌的监测，请填写表单《洁净室（区）沉降菌监测报告》，如下表所示。